多聚赖氨酸是什么?多聚赖氨酸保存、运输和使用方法

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多聚赖氨酸是什么?多聚赖氨酸溶液是广泛应用的组织切片与玻片黏合剂,该多聚阳离子分子与组织切片上的阴离子相互作用会产生较强的黏合力。本文介绍了多聚赖氨酸保存、运输和使用方法。

多聚赖氨酸是什么?多聚赖氨酸保存、运输和使用方法

多聚赖氨酸是什么

多聚赖氨酸(poly-lysine)是一种带正电荷的氨基酸聚合物,能够结合于DNA,红细胞膜或任何带负电荷蛋白,是一种非特异性的细胞粘附因子,促进细胞吸附到固相基质上。作用机理在于其可增强细胞膜表面的负电荷离子和固相基质表面(如细胞培养皿,载玻片等)的静电相互作用。当吸附到培养表面后,多聚赖氨酸提高用于细胞结合的阳离子结合位点数。多聚赖氨酸分子量的大小与粘度相关,即分子量较低,粘度较低;分子量较高,粘度较高,提供的粘附位点也较多。分子量>30,000的聚赖氨酸适用于促进细胞粘附到固体基质。

多聚赖氨酸(poly-lysine)有两种常见亚型,D-和L-型。由于多聚赖氨酸是细胞结合的非特异性粘附因子,两种亚型都可用作包被固体基质,在细胞培养中都可促进细胞的贴壁生长。

保存与运输方法

保存:−20°C干燥保存,3年稳定。

运输:冰袋运输。

1. 在某些细胞培养应用中,一些细胞会消化多聚L-赖氨酸并吸收,摄入过多的多聚L-赖氨酸会产生一定的细胞毒性。因此,遇到这种情况建议选用多聚D-赖氨酸(Poly-D-lysine),如Poly-D-lysine (Mw 150,000-300,000)(#MX0922)。

2. 本品以氢溴酸(HBr)的形式提供,若想去除本品中的氢溴酸,可将本品溶于中性缓冲液,透析除去盐离子。

3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 储存液准备

1.1 将25mg粉末溶于5ml无菌去离子水中充分溶解后,用0.2μm低蛋白吸附的滤膜过滤除菌后,即得到5mg/ml的poly-L-lysine储存液,可直接用于细胞培养用途。为了保持多次使用造成的污染,可将储存液以单次使用量分装到无菌管子内,4℃或者-20℃保存,至少1年有效。

2. 细胞培养用包被基质

使用多聚L-赖氨酸进行细胞相关包被实验,需根据不同的细胞系和应用进行包被条件的优化。一般步骤如下:
1)使用无菌组织培养级水或者PBS将5mg/ml poly-L-lysine储存液稀释到最适合自身实验体系的包被浓度。通常情况下,常用的培养皿/板包被浓度为0.1mg/ml,即将储存液稀释50倍后使用。

2)无菌条件下包被细胞培养板,使用量0.5ml-1.0ml/25cm2。轻轻摇动板底以使其覆盖整个板面。

3)5min后,用枪移除培养板表面溶液,并用无菌组织培养级水或者PBS清洗板面;注:有的情况需要1~2个小时来完成铺板,有的时候需要过夜铺板。依情况而定。

4)至少干燥2h后,方可进行细胞培养。

注:如所包被玻璃器皿或玻片需要无菌条件,可用γ-射线照射(而非高压灭菌)对其进行除菌。


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